单标记延伸结合荧光偏振技术快速检测B型流感亚系方法的建立及应用

doi:10.13217/j.scjpm.2013.04.082

华南预防医学 ›› 2013, Vol. 39 ›› Issue (4): 82-85.doi: 10.13217/j.scjpm.2013.04.082

单标记延伸结合荧光偏振技术快速检测B型流感亚系方法的建立及应用

王敬忠¹, 房师松¹, 刘涛², 王昕¹, 程小雯¹, 张仁利¹, 程锦泉¹

1 深圳市疾病预防控制中心，广东深圳 518055；2 深圳市慢性病防治中心

收稿日期:2013-03-26 出版日期:2013-08-20 发布日期:2013-12-23
通讯作者: 房师松 E-mail:szcdcssf@yahoo.com.cn
作者简介:王敬忠（1979—），男，硕士，主管医师，主要从事传染病的监测和防制工作

Establishment and application of influenza B virus using one label extension and fluorescence polarization methods

Wang Jing-zhong, Fang Shi-song, Liu Tao, WANG Xin, CHENG Xiao－wen, ZHANG Ren－li, CHENG Jin－quan

Received:2013-03-26 Online:2013-08-20 Published:2013-12-23

摘要/Abstract

摘要： 目的建立一种单标记延伸(OLE)结合荧光偏振技术(FP)快速检测B型流感By和Bv亚系的新方法。方法从GenBank下载By和Bv血凝素(HA)基因各50条序列，通过MEGA软件进行分析，利用Primer Premier 5.0设计B型流感病毒亚系特异性引物和单标记延伸引物，RT-PCR扩增目的片段，用OLE引物添加亚系特异性荧光标记的双脱氧核糖核苷酸，建立单碱基延伸终止荧光偏振检测方法。结果 RT-PCR扩增产物的大小分别为349、397和713 bp。OLE sense引物检测Bv亚系双脱氧三磷酸胸苷(ddTTP)的FP值高于双脱氧三磷酸胞苷(ddCTP)的FP值(P<0.01)，而By亚系则正好相反，ddCTP的FP值高于ddTTP(P<0.01)；OLE anti-sense引物检测Bv亚系和By亚系ddGTP和ddATP的FP值均差别不大(均P>0.05)。Bv样品毒株ddTTP的FP值均值为(159±10)mp，与Bv参照株(162 mp)相近；By样品毒株ddCTP的FP值均值为(163±10)mp，与By参照株(165 mp)相近。结论该方法操作简便、敏感性及特异性高、判读结果直观明确、检测费用低，适合于流感监测实验室对流感病毒的快速分子诊断。

中图分类号:

R511.7

王敬忠, 房师松, 刘涛, 王昕, 程小雯, 张仁利, 程锦泉. 单标记延伸结合荧光偏振技术快速检测B型流感亚系方法的建立及应用[J]. 华南预防医学, 2013, 39(4): 82-85.

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